产品货号:
GS0101
中文名称:
磁珠法植物基因组DNA提取试剂盒
英文名称:
Mag-BB Plant Genomic DNA Extraction Kit
产品规格:
50次|100次
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本试剂盒采用Buffer MPCB裂解植物样品,释放出植物基因组DNA,蛋白质、多糖和细胞碎片等杂质通过离心沉淀下来。将上清液转移到新的离心管中,在结合液的作用下MagicMag Beads选择性的吸附上清液中的基因组DNA。通过洗涤液的清洗完全除去MagicMag Beads吸附的少量杂质。在洗脱液的作用下MagicMag Beads释放吸附的基因组DNA,即获得高质量的基因组DNA。采用本制品提取植物基因组无需苯酚、氯仿抽提,从50mg植物组织中可以获得15μg DNA,OD260/OD280比值一般为1.7~1.9,抽提的DNA可直接用于下游实验。
组分 | 50次 | 100次 |
Buffer MPCB | 40mL | 80mL |
MagicMag Beads | 0.75mL | 1.5mL |
Buffer MPL | 30mL | 60mL |
Buffer MPW | 30mL | 60mL |
Proteinase K | 1.2mL | 2.4mL |
TE Buffer(pH8.0) | 10mL | 20mL |
保存:室温,其中MagicMag Beads和Proteinase K需置于2~8℃。
Buffer MPCB中含有刺激性化合物,操作过程中应穿上实验服,戴好乳胶手套,避免沾染皮肤、眼睛和衣服,防止吸入口鼻。沾染皮肤或眼睛后,请立即用清水或生理盐水冲洗,必要时寻求医生的帮助。
- 自备材料:磁力架、小型高速离心机(最大离心力≥ 12000×g)、水浴锅、1.5mL离心管、无水乙醇、70%乙醇、RNase A溶液(10mg/mL)和β-巯基乙醇。
- 每次使用前请检查Buffer MPCB是否出现沉淀,如有沉淀,请于65℃溶解之后使用。
- 将25~100mg的新鲜植物组织在液氮中充分研磨成粉末,并迅速转移至1.5mL的离心管中。
- 研磨是否充分,将直接影响基因组DNA的得率。研磨标准是在加入Buffer MPCB之后,溶液中没有大的组织团块。
- 对于含水量较多的样品,请尽量在研磨和裂解前挤干去除水分。
- 研磨是否充分,将直接影响基因组DNA的得率。研磨标准是在加入Buffer MPCB之后,溶液中没有大的组织团块。
- 加入600μL Buffer MPCB、12μL β-巯基乙醇和20μL Proteinase K溶液,震荡混匀,65℃水浴30~60min,间或混匀。
- 如需得到无RNA的DNA,可在水浴后加入20μL的RNase A (10mg/mL),混匀后室温放置5min。
- 12000rpm离心5~10min,小心吸取500μL上清液至新的1.5mL离心管中。
- 向上清液中加入500μL Buffer MPL和15μL MagicMag Beads,吸打混匀,室温静置1min。
- 向离心管中加MagicMag Beads之前,请将其充分混匀。
- 请务必将MagicMag Beads加至液面以下,尽量将枪头上残留MagicMag Beads吸打干净。
- 处理多个样品时,可先将Buffer MPL与MagicMag Beads按100:3的体积比混匀,然后向每管上清液中加入515μL上述混合液,加入的过程当中请间或混匀,确保磁珠呈悬浮状态。
- 向离心管中加MagicMag Beads之前,请将其充分混匀。
- 将离心管置于磁力架上30 s,待MagicMag Beads完全吸至管壁之后,吸弃上清,从磁力架上取出离心管。
- 吸弃上清前,若管口粘有少量MagicMag Beads,请用上清液将其洗至离心管内,以确保所有MagicMag Beads吸附至管壁上。
- 吸弃上清时,请勿吸入MagicMag Beads,尽量吸净上清。
- 从磁力架上取出离心管后,若有少量上清,请将离心管置于磁力架上,再次吸取上清。
- 吸弃上清前,若管口粘有少量MagicMag Beads,请用上清液将其洗至离心管内,以确保所有MagicMag Beads吸附至管壁上。
- (可选步骤)向离心管中加入500μL Buffer MPW,吸打混匀,将离心管置于磁力架上30 s,待MagicMag Beads完全吸至管壁之后,吸弃上清,从磁力架上取出离心管。
- 对于常规植物,请直接进行第7步;对于多糖和多酚类植物请进行此步骤之后再进行第7步。
- 吸弃上清前,若管口粘有少量MagicMag Beads,请用上清液将其洗至离心管内,以确保所有MagicMag Beads吸至管壁上。
- 吸弃上清时,请勿吸入MagicMag Beads,尽量吸净上清。
- 从磁力架上取出离心管后,若有少量上清,请将离心管置于磁力架上,再次吸取上清。
- 对于常规植物,请直接进行第7步;对于多糖和多酚类植物请进行此步骤之后再进行第7步。
- 向离心管中加入900μL 70%乙醇,吸打混匀,将离心管置于磁力架上30 s,待MagicMag Beads完全吸至管壁之后,吸弃上清,从磁力架上取出离心管。
- 吸弃上清前,若管口粘有少量MagicMag Beads,请用上清液将其洗至离心管内,以确保所有MagicMag Beads吸至管壁上。
- 吸弃上清时,请勿吸入MagicMag Beads,尽量吸净上清。
- 吸弃上清前,若管口粘有少量MagicMag Beads,请用上清液将其洗至离心管内,以确保所有MagicMag Beads吸至管壁上。
- 重复步骤7一次,室温开盖干燥15~20min或者55℃恒温箱开盖干燥5~7min至管内无液体残留。
- 干燥前,请尽量吸净管内的液体。
- 干燥前,若出现液体挂壁现象,可将离心管短暂离心之后,再将其置于磁力架上,待所有MagicMag Beads完全吸至管壁之后再吸净管内液体。
- 干燥前,请尽量吸净管内的液体。
- 加入100μL TE Buffer (pH8.0),65℃水浴5~10min,间或混匀。
- 请将管壁上所有MagicMag Beads悬浮在TE Buffer中。
- 根据实验需要可以将TE Buffer(pH8.0)用无菌的双蒸水(pH>7.5)代替。
- 请将管壁上所有MagicMag Beads悬浮在TE Buffer中。
- 取出离心管并置于磁力架上30 s,待MagicMag Beads完全吸至管壁上之后,吸取上清至新无菌的离心管,即获得基因组DNA。
- 吸取上清前,请确保MagicMag Beads完全吸至管壁,请勿吸入MagicMag Beads,否则影响基因组DNA的纯度。
- 得率低
- 样品研磨不充分。请将样品研磨成粉末。
- 样品裂解不充分。请适当延长裂解时间。
- 结合不充分。加入Buffer MPL和MagicMag Beads之后,请将其充分混匀,并使MagicMag Beads处于悬浮状态。
- 操作过程中丢失MagicMag Beads。结合及洗涤过程中可能有少量的MagicMag Beads粘在离心管管口上,吸弃上清前请用少量的上清液清洗管口,使粘在管口的MagicMag Beads也吸附至管壁上。
- 洗脱液不合适。洗脱缓冲液的pH值对洗脱效率有影响,如果使用水进行洗脱,请确保其pH值> 7.5,pH值过低可能导致低洗脱效率。
- 洗脱过程操作不当。洗脱时请将管壁上所有MagicMag Beads溶解在TE Buffer中。
- 洗脱过程忘记水浴。加入TE Buffer之后请65℃水浴5~10min,常温条件下MagicMag Beads只能释放少量的基因组DNA,65℃条件下MagicMag Beads与基因组DNA的作用力减弱,MagicMag Beads释放出大量的基因组DNA。
- 取样量太多或者太少。请严格按照说明书操作。
- 样品研磨不充分。请将样品研磨成粉末。
- 获得的DNA溶液有颜色
- 取样量过多。严格按照说明书操作,如果需要增加样本量,可以等比例增加Buffer MPCB、β-巯基乙醇、Proteinase K和MagicMag Beads的用量,其余溶液的量可以不变。
- 裂解不充分。请将组织充分研磨,适当增加Buffer MPCB用量以及适当延长裂解时间。
- 洗涤不充分。如果加入MagicMag Beads和Buffer MPL之后,混匀过程中MagicMag Beads成团状、丝状或者颗粒状,请增加吸打或者点振次数。
- 最后一步吸取上清时吸入MagicMag Beads。请确保所有MagicMag Beads吸至管壁上之后,再吸取上清。如果不小心吸入MagicMag Beads,请将上清液放回原管,待MagicMag Beads完全吸至管壁之后重新吸取上清。或者将吸取的DNA溶液10000rpm离心2min,再取上清。
- 取样量过多。严格按照说明书操作,如果需要增加样本量,可以等比例增加Buffer MPCB、β-巯基乙醇、Proteinase K和MagicMag Beads的用量,其余溶液的量可以不变。
- 获得的DNA条带弥散
- 样品不新鲜。请尽量选择新鲜的样品。
- 裂解时间过长。裂解时间不要超过90min。
- 研磨工具没有预冷。研磨样品前请用液氮充分预冷研钵和研钵棒。
- 样品不新鲜。请尽量选择新鲜的样品。
- 获得的DNA断裂、降解
- 样品没有按照要求冷冻保存。请使用新鲜样品用液氮进行研磨,样品如果因为某些原因必须先行保存,可以将样品保存于-70℃冰箱。
- 样品反复冻融。需要保存的样品应分割后保存于-70℃冰箱,避免反复冻融,确保样品的DNA未降解。
- 样品研磨不充分。液氮研磨样品时,应注意研磨充分,加入裂解液后充分混匀。
- 操作过程过于剧烈,DNA被机械打断。请严格按照说明书操作。
- 样品没有按照要求冷冻保存。请使用新鲜样品用液氮进行研磨,样品如果因为某些原因必须先行保存,可以将样品保存于-70℃冰箱。
- DNA样品不纯,抑制或者干扰后续实验反应
- 乙醇有残留。请吸弃上清后从磁力架上取出离心管,放置2min之后再将离心管置于磁力架上30 s,吸净管底的液体。若出现残液的挂壁现象,请短暂离心之后将离心管置于磁力架上30 s,吸净离心管内的液体。
- MagicMag Beads洗涤不充分。向离心管中加入70%乙醇以后,请充分混匀,使MagicMag Beads充分悬浮在70%乙醇中。
- MagicMag Beads没有完全干燥。请将MagicMag Beads完全干燥,保证无乙醇残留。
- 最后一步吸取上清时吸入MagicMag Beads。请确保所有MagicMag Beads吸至管壁上之后,再吸取上清。如果不小心吸入MagicMag Beads,请将上清液放回原管,待MagicMag Beads完全吸至管壁之后重新吸取上清。或者将吸取的DNA溶液10000rpm离心2min,再取上清。
- 乙醇有残留。请吸弃上清后从磁力架上取出离心管,放置2min之后再将离心管置于磁力架上30 s,吸净管底的液体。若出现残液的挂壁现象,请短暂离心之后将离心管置于磁力架上30 s,吸净离心管内的液体。
- 利用琼脂糖凝胶电泳检验DNA时,加样孔非常亮
- 大片段的基因组DNA由于难以电泳出加样孔,会使加样孔非常的亮。
- 使用的琼脂糖凝胶浓度过高,建议使用0.8%的琼脂糖凝胶电泳。
- 获得的DNA中含有蛋白质等杂质,建议适当减少样品用量。
- 大片段的基因组DNA由于难以电泳出加样孔,会使加样孔非常的亮。
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